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新品上市 | 舟帆生物IEC-HPLC通用流動(dòng)相

前言 離子交換色譜法是一種重要的生物化學(xué)分離技術(shù)，它基于帶電分子與固定相之間的相互作用，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)分析，使得通過(guò)酸堿變體推導(dǎo)蛋白相關(guān)降解途徑成為可能，并為相關(guān)的質(zhì)量控制和分子優(yōu)化提供指導(dǎo)數(shù)據(jù)。而在蛋白質(zhì)分析過(guò)程中，離子交換色譜法方法開(kāi)發(fā)是非常困難的,這受困于每個(gè)蛋白的空間結(jié)構(gòu)和氨基酸排列截然不同，這種跳躍式的變化使得每種蛋白擁有不同的等電點(diǎn)與唾液酸或糖基化程度，這大大增加相關(guān)方法開(kāi)發(fā)的困難程度，此開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵步驟包括多步：選擇合適的離子交換介質(zhì)、優(yōu)化緩沖體系、確定洗脫條件、調(diào)整流速和柱溫等。這些步驟確保了離子交換色譜法在蛋白質(zhì)分析中的有效性和可靠性，但繁瑣的方法開(kāi)發(fā)步驟也為試驗(yàn)帶來(lái)極大的時(shí)間成本，間接的增加投入成本，且伴隨著方法開(kāi)發(fā)失敗的風(fēng)險(xiǎn)，這成為蛋白藥物分析領(lǐng)域迫在眉睫的問(wèn)題。舟帆生物已經(jīng)開(kāi)發(fā)出關(guān)于離子交換色譜法的通用流動(dòng)相，并取得了令人鼓舞的進(jìn)展。由于樣品中各組分的電荷性質(zhì)、大小、形狀和疏水性等都會(huì)影響離子交換色譜的過(guò)程和結(jié)果，選擇合適的離子交換介質(zhì)和緩沖體系尤為重要。離子強(qiáng)度、pH值、溫度和流速等色譜條件的優(yōu)化需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定，并且離子交換色譜法中離子強(qiáng)度和pH值的微小變化都可能導(dǎo)致分離效果的顯著差異。在日常配制關(guān)于離子交換色譜法流動(dòng)相時(shí)精確控制這些參數(shù)是實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定和重復(fù)性分離的關(guān)鍵。然而，在實(shí)際操作中，由于緩沖液的制備和使用過(guò)程可能會(huì)引入誤差，通常導(dǎo)致色譜峰保留時(shí)間的遷移等問(wèn)題。為了解決上述問(wèn)題，舟帆生物自主開(kāi)發(fā)并優(yōu)化出了一款用于離子交換色譜法的通用流動(dòng)相，該產(chǎn)品綜合考慮了分析成本和時(shí)間效率，在離子色譜方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中兼具了分離效率、分析時(shí)間和成本，提供了一種高效、經(jīng)濟(jì)且通用的離子交換色譜流動(dòng)相的選擇。 材料與方法 儀器、色譜柱 安捷倫1260 高效液相色譜系統(tǒng)ThermoProPac? WCX-10 HPLC 10μm 4×250mm色譜柱樣品 實(shí)驗(yàn)中用到的樣品包括8個(gè)蛋白藥物樣品均來(lái)自合作方浙江大學(xué)藥學(xué)院生物藥制劑與分析團(tuán)隊(duì)。IEC-HPLC參數(shù) 下表列出了使用ZF-LC-0002流動(dòng)相A&B（10×）進(jìn)行IEC-HPLC液相分析的色譜參數(shù)：實(shí)驗(yàn)參數(shù) 將8種蛋白稀釋到1mg/mL,并使用CpB酶酶切，酶切后的樣品10000 rmp/min離心十分鐘取上清液進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果 見(jiàn)圖1。圖1. 8 種蛋白藥物的IEC-HPLC 色譜圖 結(jié)論 開(kāi)發(fā)出一種離子交換色譜法通用的流動(dòng)相，在8種蛋白藥物樣品的分析中使用簡(jiǎn)單的洗脫條件即可對(duì)蛋白分子的酸性變體和堿性變體達(dá)到較好的分離，為離子交換色譜法相關(guān)的方法開(kāi)發(fā)提供了一項(xiàng)優(yōu)異選項(xiàng)，可以為企業(yè)和相關(guān)研究單位大大縮短方法開(kāi)發(fā)時(shí)間和投入。產(chǎn)品訂購(gòu)信息 貨號(hào) 品名 規(guī)格 ZF-LC-0002IEC-HPLC通用流動(dòng)相（10×）盒（含A液、B液各1000mL) 試用申請(qǐng) IEC-HPLC通用流動(dòng)相試用裝火熱申請(qǐng)中，如您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，請(qǐng)關(guān)注“西美杰微信公眾號(hào)”，發(fā)送關(guān)鍵詞“IEC”，填寫(xiě)問(wèn)卷即可獲得免費(fèi)試用機(jī)會(huì)，數(shù)量有限，先到先得！品牌介紹 杭州舟帆生物科技有限公司成立于2018年，擁有一支高效的研發(fā)團(tuán)隊(duì)，是一家專(zhuān)注于生物科技領(lǐng)域的公司。公司在蛋白質(zhì)藥品工藝開(kāi)發(fā)和優(yōu)化、分子診斷等領(lǐng)域擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)優(yōu)勢(shì)。我們的產(chǎn)品包括商業(yè)化毛細(xì)管凝膠電泳檢測(cè)試劑盒、高效液相色譜離子交換檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞培養(yǎng)試劑、分子診斷試劑等。這些產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、藥物開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域，與眾多知名研究機(jī)構(gòu)和企業(yè)建立了緊密的合作關(guān)系，共同推動(dòng)生物科技的發(fā)展和應(yīng)用。北京西美杰科技有限公司是舟帆生物總代理，始終秉承著專(zhuān)業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度為客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，歡迎致電北京西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.cwwxw.cn了解更多產(chǎn)品信息。 更多>

抗體親和提取(AAE?)：革新宿主細(xì)胞蛋白(HCPs)分析的新篇章

在生物制藥領(lǐng)域，對(duì)宿主細(xì)胞蛋白(HCPs)的精準(zhǔn)分析與控制是確保藥物安全與有效性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。各國(guó)法規(guī)都有關(guān)于HCPs的論述，要求必須對(duì)生物藥品進(jìn)行分析和純化，以將宿主細(xì)胞蛋白HCPs降低到可接受的水平。 不同監(jiān)管機(jī)構(gòu)宿主細(xì)胞蛋白(HCPs)法規(guī)要求: 《中國(guó)藥典》(2020版)三部規(guī)定：針對(duì)CHO細(xì)胞，HCPs殘留需要<0.05%(相當(dāng)于小于500ppm)；針對(duì)E.coli，HCP殘留需要<0.01%。 美國(guó)藥典USP<1132>章節(jié)規(guī)定：用一種靈敏度較高的方法檢測(cè)藥品中的HCPs，其含量應(yīng)該低于檢測(cè)限(通常小于100ppm，即1mg總蛋白中HCPs含量應(yīng)小于100ng，也即<0.01%)。 歐洲藥典EP 2.6.34中規(guī)定：在生物制品中，HCP的含量應(yīng)當(dāng)小于0.1%。 國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)指南：ICH Q6B指出，需要根據(jù)ICH準(zhǔn)則采用敏感且經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的有效方法來(lái)監(jiān)控殘留的HCPs，其殘留量通常要求小于100ppm。ELISA是各國(guó)藥典推薦的在生物制品中檢測(cè)殘留HCPs的方法，可以測(cè)定HCPs的總量。并且ELISA的操作簡(jiǎn)便，是經(jīng)典的免疫學(xué)檢測(cè)方法。但ELISA檢測(cè)HCPs也有方法的局限性，比如不能從ELISA的結(jié)果中知道樣品中有哪些HCPs，或者用于檢測(cè)的抗體與哪些HCPs發(fā)生了免疫反應(yīng)。因此，監(jiān)管部門(mén)要求在使用ELISA檢測(cè)過(guò)程中HCPs殘留含量時(shí)，不僅要通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證證明試劑盒的準(zhǔn)確度，精密度，靈敏度等，而且還需要證明使用的HCPs抗體有廣泛的反應(yīng)性，即HCPs抗體覆蓋率。圖 1 HCP ELISA試劑盒檢測(cè)流程 什么時(shí)候做HCPs抗體覆蓋率驗(yàn)證？ 美國(guó)藥典USP<1132>和歐洲藥典EP2.6.34. HOST-CELL PROTEIN ASSAYS將HCPs檢測(cè)方法分為：商業(yè)化試劑盒、產(chǎn)品/工藝專(zhuān)屬性方法和平臺(tái)化方法。并指出在產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的不同階段，推薦采用不同的ELISA試劑盒用于HCPs的檢測(cè)。 USP<1132>提到在沒(méi)有平臺(tái)化方法的情況下可以在臨床前、臨床I期、II期使用商品化試劑盒；在臨床III期/工藝驗(yàn)證及產(chǎn)品上市后，由于商業(yè)化的通用HCP檢測(cè)試劑盒抗體的覆蓋率往往不足等局限性，需要考慮結(jié)合細(xì)胞類(lèi)型及工藝特異性等因素，使用平臺(tái)化方法或針對(duì)上游工藝開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品/工藝專(zhuān)屬性方法。 而在臨床II期后若是需要繼續(xù)使用商品化試劑盒，就需進(jìn)行HCPs抗體覆蓋率驗(yàn)證來(lái)評(píng)估試劑盒是否可以繼續(xù)用于質(zhì)量監(jiān)控。通常推薦在臨床II期末或者臨床三期前的這個(gè)階段去做覆蓋率驗(yàn)證，此時(shí)生產(chǎn)工藝已經(jīng)固定并且有相對(duì)充足的時(shí)間。 圖2 USP <1132>產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的不同階段HCP檢測(cè)方法的建議 HCP覆蓋率驗(yàn)證的不同技術(shù)路線(xiàn) 傳統(tǒng)的分析方法采用2D Western blot進(jìn)行覆蓋率驗(yàn)證，是基于等電點(diǎn)和分子量不同的原理，蛋白在凝膠上通過(guò)SDS-PAGE方法被分離。其中一張膠被銀染，另一張被轉(zhuǎn)到PVDF膜上，并結(jié)合ELISA試劑盒中的抗體進(jìn)行Western Blotting檢測(cè)。但因其固有的方法學(xué)限制和技術(shù)挑戰(zhàn)，往往難以全面、準(zhǔn)確地評(píng)估多克隆抗體對(duì)HCPs的覆蓋范圍。 2D WB方法限制因素： 負(fù)載能力低 樣品經(jīng)過(guò)前處理會(huì)破壞蛋白天然表位 HCPs結(jié)合到PVDF膜上導(dǎo)致?lián)p失部分檢測(cè)到的抗體信息 難以完全將PAGE凝膠與WB圖片對(duì)齊 特異性差，顯著低估真實(shí)抗體覆蓋率 為了克服這一難題，Cygnus Technologies于2014年創(chuàng)新性地推出了抗體親和提取(Antibody Affinity Extraction，AAE?)技術(shù)，目的是提高細(xì)胞培養(yǎng)收獲液中總HCPs混合物的靈敏度和覆蓋率評(píng)估，并可以檢測(cè)對(duì)下游工藝特異性HCPs的反應(yīng)性，這些通常也是最為關(guān)注的HCPs。與2D-PAGE和2D-WB的靈敏度受負(fù)載能力等限制不同，AAE?的靈敏度可高出100倍以上，因?yàn)樗軌蛱崛『蜐饪s大量樣品。 表 1 AAE與2D-WB覆蓋率技術(shù)路線(xiàn)對(duì)比 AAE 2D-WB 靈敏度 可富集mg級(jí)HCPs 靈敏度高(>95%) 因WB方法的局限性，覆蓋率被低估 靈敏度低(50-70%) 特異性 無(wú)變性處理特異性高(>99.5%) 抗原變性處理后特異性結(jié)合低(50-80%) 覆蓋率 AAE+2D-PAGE 60-90% AAE-MS 70-95% 50-70% 適用性 純化前和純化后均可 只是適合純化前樣品 AAE分析流程首先將多克隆抗體共價(jià)固定在色譜柱上。然后對(duì)色譜柱進(jìn)行條件調(diào)節(jié)，以防止抗體的顯著浸出并極大地減少任何非特異性結(jié)合。原始未變性的HCPs樣品通過(guò)色譜柱與抗體進(jìn)行結(jié)合，隨后用酸洗脫。通過(guò)結(jié)合和洗脫，HCPs樣品再次在柱上循環(huán)，直到?jīng)]有其他HCPs被結(jié)合。所有收集的HCPs洗脫液再匯集、交換緩沖液并濃縮回原始樣品體積，為后續(xù)的分析提供高質(zhì)量的樣本。在收集到HCPs樣本后，可以選擇通過(guò)2D-PAGE+銀染或MS質(zhì)譜進(jìn)行后續(xù)分析。 圖3 USP <1132>產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的不同階段HCP檢測(cè)方法的建議 抗體對(duì)下游HCPs的反應(yīng)性和AAE-MS?的HCPs鑒定 AAE?技術(shù)的優(yōu)勢(shì)不僅在于其高靈敏度，更在于其強(qiáng)大的預(yù)測(cè)能力和廣泛的應(yīng)用前景。通過(guò)AAE-MS?獲得的覆蓋率的結(jié)果更高、更真實(shí)，可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)抗HCPs抗體在ELISA中的表現(xiàn)。并且，AAE?與質(zhì)譜聯(lián)用(AAE-MS?)能夠識(shí)別收獲材料中與抗體反應(yīng)的HCPs，并獲得蛋白質(zhì)的分子量和等電點(diǎn)(pI)信息，可以評(píng)估純化過(guò)程中持續(xù)存在的單個(gè)HCPs，并優(yōu)化下游純化工藝。 圖4 F650S HEK2 93抗體覆蓋率驗(yàn)證 值得一提的是，AAE?技術(shù)在檢測(cè)并證明對(duì)單個(gè)下游HCP的反應(yīng)性方面表現(xiàn)出色。更主要的是質(zhì)譜可以對(duì)樣品中是否存在潛在高風(fēng)險(xiǎn)的HCPs做出鑒定并提供這些蛋白的注釋信息。通過(guò)AAE?技術(shù)，能夠更準(zhǔn)確地識(shí)別和量化這些高風(fēng)險(xiǎn)HCPs。這些通過(guò)特定純化過(guò)程持續(xù)存在的高風(fēng)險(xiǎn)HCPs對(duì)于患者安全、藥物功效和穩(wěn)定性至關(guān)重要，無(wú)論是藥物研發(fā)人員還是監(jiān)管人員都能通過(guò)這一技術(shù)清楚地了解工藝中某個(gè)HCP的殘留情況，從而為藥物的研發(fā)和生產(chǎn)提供強(qiáng)有力的支持。 表 2 CHO細(xì)胞高風(fēng)險(xiǎn)HCPs 高風(fēng)險(xiǎn)蛋白（CHO） PRE F550 F550-1 pl MW 78 kDa glucose regulated protein (BiP,HSPA5) N Y Y 5.07 72379.1 Cathepsin B(CTSB) Y Y Y 5.73 35646.9 Cathepsin D Y Y Y 6.54 44110.9 Cathepsin E N N N 4.61 42726.4 Clusterin Y Y Y 5.58 51557.5 Glutathione S transferase P N Y Y 7.64 23638.2 Matrix Metalloproteinase 19 Y Y Y 7.71 58942 Monocyte chemoattractant protein 1(MCP-1) Y Y Y 9.32 15858.4 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Y Y Y 9.59 23634.4 …. AAE-MS?在藥物原液和過(guò)程樣品監(jiān)控中的應(yīng)用 AAE-MS?也可以對(duì)藥物原液中HCPs富集的同時(shí)去除了大部分原料藥。去除原料藥極大地提高了通過(guò)2D-PAGE和質(zhì)譜分析識(shí)別單個(gè)HCPs的能力，因?yàn)樗幤吠ǔＲ?04-106的倍數(shù)掩蓋HCPs。AAE-MS?是一種更客觀(guān)和直接的方法檢測(cè)和鑒定原料藥中任何潛在的HCPs雜質(zhì)以幫助優(yōu)化下游純化工藝。 圖5 AAE對(duì)藥物原液中HCPs的富集 圖6 AAE-MS?對(duì)藥物原液中高風(fēng)險(xiǎn)HCPs的富集和鑒定總之，抗體親和提取(AAE?)技術(shù)以其卓越的性能和廣泛的應(yīng)用前景，正在逐步成為生物制藥領(lǐng)域HCPs分析的新標(biāo)準(zhǔn)。它不僅能夠克服傳統(tǒng)方法的局限性，更在靈敏度、預(yù)測(cè)能力和應(yīng)用深度上實(shí)現(xiàn)了顯著提升。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，相信AAE?將在未來(lái)為更多藥物的研發(fā)和生產(chǎn)貢獻(xiàn)力量，為患者帶來(lái)更加安全、有效的治療方案助力。 支持文獻(xiàn) [1] USP <1132> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals. [2] USP <1132.1> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry. [3] EP-2.6.34. Host-Cell Protein Assays. [4] Host Cell Protein Analysis: Immunoassays and Orthogonal Characterization By Antibody Affinity Extraction and Mass Spectrometry Methods [5] Antibody Affinity Extraction (AAE?) - A superior alternative to 2D Western blot for determination of polyclonal anti-HCP reactivity. [6] Antibody Affinity Extraction (AAE?) Empowers HCP Identification by Mass Spectrometry. 更多>

熒光標(biāo)記二抗種類(lèi)繁多，如何選擇？

一般來(lái)講，偶聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團(tuán)（FITC, RRX, TR, PE, Rhodamine）和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)，對(duì)于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶標(biāo)二抗；而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞免疫化學(xué)，組織免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)）中通常使用熒光標(biāo)記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào)，可以使Biotin/Avidin檢測(cè)系統(tǒng)。其中熒光素是具有光致熒光特性的染料，熒光染料種類(lèi)很多，目前常用于熒光標(biāo)記二抗的主要有以下幾種： 異硫氰酸熒光素-Fluorescein Isothiocyanate (FITC) FITC純品為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。FITC分子量為389.4，最大吸收光波長(zhǎng)為490～495nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應(yīng)用最廣泛的熒光素。由于FITC是小分子化合物，每一個(gè)抗體可標(biāo)記幾個(gè)FITC分子，IgM通常用小分子的熒光素標(biāo)記，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。FITC熒光二抗主要優(yōu)點(diǎn)是人眼對(duì)黃綠色較為敏感，通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。然而FITC的缺點(diǎn)是淬滅快，因此要和抗淬滅劑一起使用。 四甲基異硫氰酸羅丹明-Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate(TRITC)，Rhodamine Red-X(RRX), Texas Red(TR) 這些羅丹明的衍生物耦聯(lián)基團(tuán)具有不同的吸收波長(zhǎng) (550, 570, 596nm)和最大發(fā)射波長(zhǎng)（570, 590, 620nm）。在使用裝有氪氬燈的激光共聚焦掃描顯微鏡作三標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)時(shí)，RRX尤其有用，可以和Cy2(或者FITC)和Cy5一起使用，因?yàn)镽RX的發(fā)射波長(zhǎng)在Cy2和Cy5中間，而且和這兩者覆蓋都很少，氪氬燈激發(fā)光為488nm，598nm和647nm，分別是Cy2(FITC), RRX和Cy5的理想激發(fā)波長(zhǎng)。因?yàn)镕ITC和PE可以被氬燈的488nm波長(zhǎng)激發(fā), 在流式細(xì)胞儀中用FITC作雙標(biāo)，另一種用藻紅蛋白（PE）耦聯(lián)基團(tuán)要比羅丹明好。TRITC為羅丹明的衍生物，呈紫紅色粉末，較穩(wěn)定，最大吸收光波長(zhǎng)為 550nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為620nm，呈現(xiàn)橙紅色熒光，與FITC的綠色熒光對(duì)比鮮明，可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧?。因TRITC熒光淬滅慢，也可用于單獨(dú)標(biāo)記染色。 菁類(lèi)染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5) Cy2耦聯(lián)基團(tuán)激發(fā)波長(zhǎng)為492nm，發(fā)光波長(zhǎng)為510nm的綠色可見(jiàn)光。Cy2和FITC使用相同的濾波片。由于Cy2比FITC在光下更穩(wěn)定，要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片劑，因?yàn)檫@種抗淬滅劑和Cy2反應(yīng)，在染色片儲(chǔ)存后會(huì)導(dǎo)致熒光微弱和擴(kuò)散。Cy3和Cy5比其他的熒光團(tuán)探針要更亮，更穩(wěn)定，背景更弱。Cy3耦聯(lián)基團(tuán)激發(fā)光的最大波長(zhǎng)為550nm，最強(qiáng)發(fā)射光為570nm。因?yàn)榧ぐl(fā)光和發(fā)射光波長(zhǎng)很接近TRITC, 在熒光顯微鏡中，可使用和TRITC一樣的濾波片。Cy3在氬光燈（514nm或528nm）下可以被激發(fā)出50％的光強(qiáng)，在氦氖燈（543nm）或者汞燈（546nm）下則約75％。Cy3可以和熒光素一起作雙標(biāo)。Cy3還可以和Cy5一起在共聚焦顯微鏡實(shí)驗(yàn)中作多標(biāo)記。Cy5耦聯(lián)基團(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)最大650nm，發(fā)光波長(zhǎng)最大670nm。在氪氬燈（647nm）下它們可被激發(fā)出98％的熒光，在氦氖燈下（633nm）為63％。Cy5可以和很多其他的熒光基團(tuán)一起用在多標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)中。由于它的最大發(fā)射波長(zhǎng)在670nm，Cy5很難用裸眼觀(guān)察，而且不能用汞燈作理想的激發(fā)。通常觀(guān)察Cy5時(shí)采用具有合適激發(fā)光和遠(yuǎn)紅外檢測(cè)器的共聚焦顯微鏡，在水相封片劑中應(yīng)當(dāng)加入抗淬滅劑。使用傳統(tǒng)的表面熒光顯微鏡時(shí)，不推薦使用Cy5。注：由于觀(guān)察熒光需要一定波長(zhǎng)的激發(fā)光，必須根據(jù)實(shí)驗(yàn)室已有的儀器可發(fā)光的波段進(jìn)行選擇。另外注意多標(biāo)記中對(duì)探針色彩區(qū)分程度的要求，例如，若丹明紅-X (RRX)和德克薩斯紅(TR)熒光素的區(qū)別就比四甲基若丹明（TRITC）或者Cy3的區(qū)別明顯。如果對(duì)靈敏度有更高的要求，則Cy3和Cy5就比其他的熒光團(tuán)探針要亮。 西美杰代理的全球知名二抗和底物生產(chǎn)廠(chǎng)商LGC·Seracare·KPL提供豐富的熒光標(biāo)記二抗，可檢測(cè)抗人、大鼠、小鼠、豬、驢、綿羊、山羊、小雞、馬、兔、倉(cāng)鼠、狗、牛，以及多種細(xì)菌類(lèi)等物種；另外，還有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同類(lèi)型抗體。小編下面匯總了部分常用熒光二抗：FITCTRITCCy3Cy5抗人5230-02885230-0288-5230-0370抗小鼠5230-04275230-03365230-03645230-0376抗兔5230-02985230-03325230-03595230-0372抗山羊5230-0294-5230-03585230-0371抗綿羊5230-0324---抗雞5230-0325--5230-0379抗鴨5230-0326---抗狗5230-0314---抗貓5230-0317---鏈霉親和素5270-0028 -5270-0022 -注：表格數(shù)字部分為產(chǎn)品貨號(hào)如對(duì)西美杰代理的LGC·Seracare·KPL產(chǎn)品感興趣歡迎撥打西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄官方網(wǎng)站www.cwwxw.cn了解更多信息。 更多>

Jena Bioscience熒光標(biāo)記試劑盒，科研優(yōu)選

標(biāo)記核苷酸是生命科學(xué)研究的一類(lèi)關(guān)鍵試劑，是分子生物學(xué)研究中用于檢測(cè)和標(biāo)記特定核酸序列的有效工具，通常通過(guò)酶反應(yīng)將標(biāo)記核苷酸插入到DNA或RNA序列中進(jìn)行檢測(cè)和分析。而熒光基團(tuán)和半抗原是最常用的非放射性DNA/cDNA探針標(biāo)記物。 Nick translation是基因組DNA、質(zhì)粒、BAC克隆等生成標(biāo)記DNA探針（100-500bp）的首選方法。它是基于DNA酶I(introduction of random single-strand breaks (“nicks”)和聚合酶I的協(xié)同反應(yīng)，聚合酶I在“nick”位點(diǎn)結(jié)合標(biāo)記的dUTP，而不是其天然對(duì)應(yīng)物dTTP，從而創(chuàng)造出理想的原位雜交探針。 西美杰代理的Jena Bioscience品牌提供了有豐富的DNA/cDNA標(biāo)記產(chǎn)品，包括熒光標(biāo)記和半抗原標(biāo)記，如下表所示:Fluorescent Nick Translation Labeling Kits 品名 貨號(hào) 規(guī)格 Atto425 NT Labeling Kit PP-305S-425 10 reactions Fluorescein NT Labeling Kit PP-305S-FAMX 10 reactions AF488 NT Labeling Kit PP-305S-AZ488 10 reactions Atto488 NT Labeling Kit PP-305S-488 10 reactions Cy3 NT Labeling Kit PP-305S-CY3 10 reactions Atto550 NT Labeling Kit PP-305S-550 10 reactions AF555 NT Labeling Kit PP-305S-AF555 10 reactions TexasRed NT Labeling Kit PP-305S-TXR 10 reactions AF594 NT Labeling Kit PP-305S-AF594 10 reactions Atto647N NT Labeling Kit PP-305S-647N 10 reactions AF647 NT Labeling Kit PP-305S-AF647 10 reactions Atto680 NT Labeling Kit PP-305S-680 10 reactions Biotin & Digoxigenin Nick Translation Labeling Kits 品名 貨號(hào) 規(guī)格 Biotin16 NT Labeling Kit PP-310S-BIO16 10 reactions Digoxigenin NT Labeling Kit PP-310S-DIGX 10 reactions 北京西美杰科技有限公司為Jena Bioscience中國(guó)代理，為客戶(hù)提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎撥打西美杰客服電話(huà)400-050-4006或者登陸網(wǎng)站 西美杰代理的Jena Bioscience由德國(guó)馬普所(MPI)的知名分子生物學(xué)家于1998年共同創(chuàng)辦，致力于為全球的科研院所，醫(yī)院，制藥企業(yè)和診斷試劑盒生產(chǎn)企業(yè)提供各類(lèi)試劑與原料, 供應(yīng)特色標(biāo)記核苷酸/類(lèi)核苷，標(biāo)記熒光探針、點(diǎn)擊化學(xué)、蛋白結(jié)晶等產(chǎn)品，分別通過(guò)DIN EN ISO 9001，DIN EN ISO 14001，EMAS認(rèn)證，質(zhì)量被80多個(gè)國(guó)家客戶(hù)認(rèn)可。 品牌優(yōu)勢(shì)： 以核苷，核苷酸類(lèi)似物為特色的產(chǎn)品 種類(lèi)齊全：核苷，核苷酸及類(lèi)似物，蛋白及蛋白表達(dá)系統(tǒng)，點(diǎn)擊化學(xué)試劑，生物大分子結(jié)構(gòu)研究相關(guān)試劑，分子生物學(xué)和生物化學(xué)相關(guān)試劑 強(qiáng)大的技術(shù)團(tuán)隊(duì)可提供高質(zhì)量定制服務(wù) 產(chǎn)品質(zhì)量有保障，通過(guò)多種認(rèn)證 產(chǎn)品和服務(wù)被80多個(gè)國(guó)家客戶(hù)認(rèn)可 主要產(chǎn)品分類(lèi)： 核苷、核苷酸類(lèi)似物： 標(biāo)記核苷酸、脫氧/雙脫氧核糖核苷酸、核苷酸類(lèi)似物 點(diǎn)擊化學(xué)：帶有點(diǎn)擊基團(tuán)的核苷酸、熒光素、生物素、ATP類(lèi)似物等； 蛋白結(jié)構(gòu)相關(guān)產(chǎn)品：蛋白結(jié)晶條件篩選試劑盒、蛋白結(jié)晶耗材 分子生物學(xué)：不同要求PCR試劑盒及單組分產(chǎn)品，DNA LEEDER，限制性?xún)?nèi)切酶、TAE、TBE 更多>

【技術(shù)在線(xiàn)】HCP ELISA方法驗(yàn)證——稀釋線(xiàn)性dilution linearity

稀釋線(xiàn)性（dilution linearity）是驗(yàn)證HCP ELISA方法特異性和準(zhǔn)確性的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)之一，本文詳細(xì)解讀了HCP ELISA方法學(xué)驗(yàn)證中有關(guān)稀釋線(xiàn)性的操作方法與注意事項(xiàng)，歡迎了解。 更多>

Mirus Bio新上市轉(zhuǎn)染試劑TransIT?-AAViator，基于逆向工程，最大化的提升AAV滴度和實(shí)心率！

腺相關(guān)病毒 (AAV) 是基因治療中最廣泛使用的傳遞/遞轉(zhuǎn)機(jī)制。近年來(lái)，基于A(yíng)AV病毒所開(kāi)發(fā)的基因療法研發(fā)及臨床試驗(yàn)注冊(cè)數(shù)量也呈指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)，也需要AAV病毒生產(chǎn)工藝及產(chǎn)能的不斷優(yōu)化及擴(kuò)展，從最早基于貼壁細(xì)胞工藝升級(jí)轉(zhuǎn)換到以懸浮為主的200-2000L反應(yīng)體系。 Mirus Bio成立于1996年，在核酸遞送領(lǐng)域深耕多年，于2021年8月推出GMP級(jí)別TransIT-VirusGEN&reg; GMP 轉(zhuǎn)染試劑，支持AAV及LV從科研到GMP商業(yè)化生產(chǎn)。不同于傳統(tǒng)基于單組分的轉(zhuǎn)染試劑(如陽(yáng)離子聚合物聚乙烯亞胺，PEI)，Mirus Bio將專(zhuān)利的多聚物及脂質(zhì)技術(shù)進(jìn)行多重組合，形成多功能性的轉(zhuǎn)染方案，克服細(xì)胞遞轉(zhuǎn)過(guò)程中的多重阻礙，以實(shí)現(xiàn)更高效轉(zhuǎn)染和更低細(xì)胞毒性，從而大幅度提升多種血清型AAV病毒生產(chǎn)載量。去年7月底Mirus上市RevIT? AAV Enhancer，已證明在不同AAV血清型別中，可提高AAV病毒基因組滴度1.2-4.9倍，并且在一定程度改善了實(shí)心率。更重要的是，RevIT? AAV Enhancer不僅可以搭配Mirus TransIT-VirusGEN&reg; GMP 轉(zhuǎn)染試劑，也適配于其他轉(zhuǎn)染試(如PEI等)，使得AAV生產(chǎn)上游成本的進(jìn)一步降低成為可能，進(jìn)而降低了基因治療單劑量成本。下圖展示了國(guó)內(nèi)客戶(hù)前期測(cè)試反饋結(jié)果，測(cè)試包括了不同血清型別的質(zhì)粒設(shè)計(jì)，適用于國(guó)內(nèi)及國(guó)外品牌的轉(zhuǎn)染試劑、細(xì)胞及培養(yǎng)基體系，實(shí)現(xiàn)了1.5-4倍以上的AAV病毒滴度提升。 RevIT Enhancer在國(guó)內(nèi)客戶(hù)不同AAV項(xiàng)目平臺(tái)上的測(cè)試反饋結(jié)果 隨著國(guó)內(nèi)外客戶(hù)項(xiàng)目及管線(xiàn)推進(jìn)，已有越來(lái)越多的客戶(hù)將TransIT-VirusGEN&reg; 轉(zhuǎn)染試劑以及RevIT? AAV Enhancer從搖瓶階段線(xiàn)性放大至200L-500L反應(yīng)器，并且已應(yīng)用到處于臨床申報(bào)產(chǎn)品中。ReciBioPharm 與Mirus Bio合作， Chris Brown(工藝流程開(kāi)發(fā)部門(mén))在線(xiàn)上(鏈接)展示了TransIT-VirusGEN 和RevIT? AAV Enhancer數(shù)據(jù)結(jié)果，并且比較了所有測(cè)試規(guī)模(搖瓶&反應(yīng)器)，反饋病毒滴度放大效果非常好，并且實(shí)心率也保持相同水平，在 50 升的生物反應(yīng)器中，也有著40%以上實(shí)心率。Chris Brown表示“選擇用TransIT-VirusGEN 和RevIT? AAV Enhancer產(chǎn)品，是基于我們以往的測(cè)試數(shù)據(jù)，允許最大限度地提高 AAV 產(chǎn)量。產(chǎn)量的提高，單個(gè)50 升生物反應(yīng)器可生產(chǎn)更多劑量，從而降低單位劑量的成本?！?更多的，Bridgebio在poster中分享了基于A(yíng)AV5型別，使用TransIT-VirusGEN&reg; 轉(zhuǎn)染試劑以及RevIT? AAV Enhancer從搖瓶線(xiàn)性放大至200L反應(yīng)體系(125mL搖瓶→2L → 10L → 200L)，病毒滴度和實(shí)心率數(shù)據(jù)結(jié)果(圖1)。與原有工藝相比 (Process A：PEIPro轉(zhuǎn)染 + Expi293細(xì)胞/培養(yǎng)基)，替換成TransIT-VirusGEN&reg; 轉(zhuǎn)染試劑后的工藝流程 (Process B：TransIT-VirusGEN&reg; 轉(zhuǎn)染試劑 + Expi293細(xì)胞 + BalanCD培養(yǎng)基；Process C：TransIT-VirusGEN&reg; 轉(zhuǎn)染試劑 + VP2.0細(xì)胞 + BalanCD培養(yǎng)基)均有著更高的病毒滴度(圖2)和更低的宿主DNA和質(zhì)粒DNA殘留。 圖1. 從125mL搖瓶線(xiàn)性放大至200L反應(yīng)體系的病毒滴度和實(shí)心率數(shù)據(jù)結(jié)果 圖2. 采用Mirus的工藝平臺(tái)均有著更高的病毒滴度 Mirus Bio 并沒(méi)有止步于此，并于2024年10月7日重磅推出 TransIT&reg;-AAViator AAV轉(zhuǎn)染試劑。繼續(xù)沿用Mirus Bio 多聚物及脂質(zhì)兩組分的經(jīng)典組合，不同的是應(yīng)用逆向工程思維，基于現(xiàn)有RevIT? AAV Enhancer，從Mirus Bio多聚物及脂質(zhì)庫(kù)中，分別篩選出更優(yōu)化的脂質(zhì)和聚合物配方。新推出的TransIT&reg;-AAViator轉(zhuǎn)染體系，進(jìn)一步降低了 AAV工藝生產(chǎn)流程中所需質(zhì)粒 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑使用量，最大限度地提高不同AAV血清型滴度和實(shí)心率，從而提升 AAV生產(chǎn)工藝的總體生產(chǎn)效率。整合TransIT&reg;-AAViator的AAV病毒上游生產(chǎn)工藝，無(wú)需通過(guò)細(xì)胞密度而調(diào)整試劑和質(zhì)粒DNA加入量，并且實(shí)現(xiàn)了單個(gè)生物反應(yīng)器的生產(chǎn)劑量的成倍增加，大幅度降低了單位劑量的成本，為基于A(yíng)AV 病毒的基因治療開(kāi)發(fā)提供了更優(yōu)的解決方案。 產(chǎn)品詳情 產(chǎn)品名稱(chēng): TransIT&reg;-AAViator Transfection System 上市日期：2024年10月7日 產(chǎn)品貨號(hào): MIR 73750 / MIR 73745 產(chǎn)品組分：TransIT&reg;-AAViator轉(zhuǎn)染試劑及RevIT? AAV增強(qiáng)子 Mirus Bio AAV病毒生產(chǎn)相關(guān)轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品參數(shù) * HDPE材質(zhì)管/瓶 *只針對(duì)30 mL以及150 mL 規(guī)格試劑 **只針對(duì)150 mL 規(guī)格試劑 TransIT-AAViator&reg;提升AAV生產(chǎn)效率&降低單劑量成本 生產(chǎn)劑量的成倍增加 隨著AAV病毒滴度的提升，單個(gè)反應(yīng)器所允許生產(chǎn)劑量也成倍的增加，從而大幅度降低單劑量成本。 減少生產(chǎn)所需批次 提高AAV病毒生產(chǎn)總產(chǎn)量，減少每次生產(chǎn)的所需批次數(shù)量或擴(kuò)大生物反應(yīng)器規(guī)模才可滿(mǎn)足生產(chǎn)需求，緩解了由于產(chǎn)能不足等諸多限制。 減少質(zhì)粒DNA用量 TransIT&reg;-AAViator 轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，降低了至少一半質(zhì)粒 DNA使用量 ，同時(shí)仍可保持高水平的滴度和實(shí)心率，進(jìn)一步降低了批次生產(chǎn)成本。 加快工藝開(kāi)發(fā)進(jìn)程 TransIT&reg;-AAViator 轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，只需較少實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，即可獲得最佳結(jié)果，從而縮短了工藝開(kāi)發(fā)時(shí)間，加快了產(chǎn)品上市速度。 TransIT&reg;-AAViator有著更高滴度和實(shí)心率 使用不同的質(zhì)粒設(shè)計(jì)(GFP基因-圖3；RPE65 基因-圖4)，平行比較TransIT&reg;-AAViator 轉(zhuǎn)染系統(tǒng)與“Poly F”(Polyplus FectoVIR&reg; 病毒轉(zhuǎn)染試劑)以及“Poly P” (Polyplus PEIpro&reg;病毒轉(zhuǎn)染試劑)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在不同AAV血清型別中 (AAV5、8、9)，TransIT&reg;-AAViator 轉(zhuǎn)染系統(tǒng)有著更高的病毒滴度及實(shí)心率，當(dāng)質(zhì)粒設(shè)設(shè)計(jì)替換成治療性基因(RPE65 基因)，病毒滴度及實(shí)心率相比于競(jìng)爭(zhēng)品牌，其優(yōu)勢(shì)更加顯著。 圖3. 轉(zhuǎn)染GFP基因質(zhì)粒的AAV滴度 圖4. 轉(zhuǎn)染RPE65基因質(zhì)粒的AAV滴度 TransIT&reg;-AAViator降低質(zhì)粒DNA用量 TransIT&reg;-AAViator轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，在較低質(zhì)粒 DNA 用量仍可得到高水平AAV病毒滴度及實(shí)心率（圖5）。 圖5. 實(shí)驗(yàn)使用TransIT&reg; -AAViator轉(zhuǎn)染試劑(試劑:DNA比例為1.25:1,vol:wt)，以 1:1:1 的質(zhì)粒質(zhì)量比轉(zhuǎn)染 pAAV-WPRE-GFP (Aldevron), pAAV-Helper (Aldevron) 和 pAAV-RepCap (AAV9 Genemedi)三質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染時(shí)加入RevIT AAV Enhancer（1 μl/mL），轉(zhuǎn)染后 72 小時(shí)使用化學(xué)裂解法收獲 AAV病毒。 TransIT-AAViator實(shí)驗(yàn)流程 Step 1: 轉(zhuǎn)染前，需保證生長(zhǎng)在培養(yǎng)基中的懸浮 HEK 293 細(xì)胞活率 > 95%。 Step 2: 轉(zhuǎn)染時(shí)：建議細(xì)胞密度為 ~ 3 × 10E6 cells/mL，TransIT&reg;- AAViator 試劑與DNA 加入比例為1:1 - 1.5:1，每 1 mL 培養(yǎng)基加入RevIT AAV Enhancer 0.5 - 1.5 μl；靜止條件下孵育15-45 分鐘，以便形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物，然后輕柔的加入細(xì)胞中。 Step 3: 轉(zhuǎn)染后無(wú)需更換培養(yǎng)基，一般可在轉(zhuǎn)染后 48-72 小時(shí)收獲AAV病毒。 客戶(hù)案例分享 最新線(xiàn)上webinar：Enhancing AAV Production: A Novel Transfection System for Cell and Gene Therapy Applications (鏈接) 演講者信息： Webinar內(nèi)容一覽： 通過(guò)該線(xiàn)上Webinar，可了解TransIT&reg;-AAViator 轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，包括了開(kāi)發(fā)初衷、數(shù)據(jù)性能對(duì)比及展示等。來(lái)自Affinia Therapeutics 高級(jí)工藝開(kāi)發(fā) Michael White， 強(qiáng)調(diào)了該轉(zhuǎn)染系統(tǒng)的可擴(kuò)展性和工作流程的易整合性，是想要優(yōu)化上游工藝和增加整體成本效益的理想選擇。 此外，Michael White分享了 Affinia Therapeutics AAV轉(zhuǎn)染平臺(tái)體系納入TransIT&reg;-AAViator 轉(zhuǎn)染系統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)，強(qiáng)調(diào)該系統(tǒng)能夠降低質(zhì)粒DNA用量，同時(shí)也在不同規(guī)模中進(jìn)行了測(cè)試(搖瓶-3L反應(yīng)器)，可穩(wěn)定的保持高水平滴度，從而大幅度提高了生產(chǎn)工藝的效率，同時(shí)降低了AAV病毒生產(chǎn)成本。 討論重點(diǎn)包括： Affinia 比較了新一代轉(zhuǎn)染系統(tǒng)TransIT&reg;-AAViator與當(dāng)前使用的平臺(tái)工藝； Affinia 在將TransIT-AAViator&reg; 與其他試劑性能進(jìn)行比較中，如何優(yōu)化使其性能顯著優(yōu)于其他轉(zhuǎn)染試劑； 整合TransIT&reg;-AAViator轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，相比于優(yōu)化前實(shí)現(xiàn)了3 倍滴度提升及 70% 實(shí)心率。 小結(jié) 新一代專(zhuān)為優(yōu)化AAV 生產(chǎn)工藝而推出的轉(zhuǎn)染試劑: TransIT&reg;-AAViator 轉(zhuǎn)染系統(tǒng)： 與基于單個(gè)組分(如PEI)轉(zhuǎn)染試劑不同，可顯著的提高不同AAV 血清型別的滴度及實(shí)心率； 有著更低轉(zhuǎn)染試劑及質(zhì)粒DNA使用量需求，同時(shí)保持高水平的AAV滴度及實(shí)心率； 相比于競(jìng)爭(zhēng)品牌(FectoVIR&PEIpro等)，有著更高基因組滴度及實(shí)心率，并且質(zhì)粒設(shè)計(jì)為治療基因，其優(yōu)勢(shì)更加顯著。 相關(guān)產(chǎn)品信息及鏈接 產(chǎn)品名稱(chēng) 規(guī)格 貨號(hào) NEW! TransIT&reg;-AAViator Transfection System 2 x 1.5 ml MIR 73750 1 × 30 ml MIR 73745 RevIT? AAV Enhancer 1.5 ml MIR 8000 10 x 1.5 ml MIR 8006 75 ml MIR 8080 NEW! RevIT? GMP AAV Enhancer 200 ml MIR 8200-GMP VirusGEN&reg; AAV轉(zhuǎn)染試劑及RevIT? AAV Enhancer For 1L of Culture MIR 8007 For 10L of Culture MIR 8008 TransIT-VirusGEN&reg;轉(zhuǎn)染試劑 0.3 ml MIR 6703 0.75 ml MIR 6704 1.5 ml MIR 6700 5 x 1.5 ml MIR 6705 10 x 1.5 ml MIR 6706 30 ml MIR 6720 TransIT-VirusGEN&reg; GMP級(jí)別轉(zhuǎn)染試劑 150 ml MIR 6845-GMP VirusGEN&reg; AAV轉(zhuǎn)染試劑(套裝) 1 kit for 1 L of cell culture MIR 6750 VirusGEN&reg; GMP級(jí)別AAV轉(zhuǎn)染試劑(套裝) 1 Kit - for 50 L of cell culture MIR 6815-GMP VirusGEN&reg; LV轉(zhuǎn)染試劑(套裝) 1 kit for 1 L of cell culture MIR 6760 VirusGEN&reg; GMP級(jí)別LV轉(zhuǎn)染試劑(套裝) 1 Kit - for 50 L of cell culture MIR 6825-GMP Mirus成立于1995年，始終秉承著為基因遞轉(zhuǎn)提供優(yōu)化方法及高效的工具。憑借超過(guò) 25 年轉(zhuǎn)染領(lǐng)域的深根細(xì)作，獲得了多項(xiàng)技術(shù)突破，已成為核酸遞送領(lǐng)域的全球領(lǐng)導(dǎo)者和值得信賴(lài)的品牌。Mirus科學(xué)家團(tuán)隊(duì)不斷突破轉(zhuǎn)染技術(shù)的極限，推出了VirusGEN&reg;轉(zhuǎn)染試劑與RevIT?增強(qiáng)劑，進(jìn)一步提升AAV/LV產(chǎn)量，助力推動(dòng)生物治療藥物的降本增效，為CGT領(lǐng)域客戶(hù)賦能。 北京西美杰科技有限公司是Mirus中國(guó)區(qū)代理，始終秉承著專(zhuān)業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度為客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，歡迎致電北京西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.cwwxw.cn了解更多產(chǎn)品信息。 更多>

一款適用于細(xì)胞庫(kù)的全能細(xì)胞凍存液Bambanker

Bambanker細(xì)胞凍存液保護(hù)性能好、成分明確且滿(mǎn)足GMP生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，是生物制品細(xì)胞庫(kù)凍存的理想方案。 更多>

生物制品內(nèi)毒素去除策略——Etoxiclear?內(nèi)毒素親和層析

內(nèi)毒素作為生物藥安全檢項(xiàng)，是法規(guī)要求的必檢項(xiàng)，所有藥物生產(chǎn)對(duì)于內(nèi)毒素的控制都非常嚴(yán)格（＜5EU/kg體重），內(nèi)毒素的去除成為生物藥工藝控制的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。內(nèi)毒素去除目前面臨的困境是比較耗時(shí)，同時(shí)去除過(guò)程也會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)品的損失以及毒性物質(zhì)的引入。所以?xún)?nèi)毒素的去除一直困擾很多企業(yè)，特別是在大腸桿菌大規(guī)模生產(chǎn)階段。 內(nèi)毒素的去除方法主要有超速離心，離子交換和親和層析的方法，在大規(guī)模生產(chǎn)工藝中內(nèi)毒素的去除主要采用后兩種方式，離子交換原理是結(jié)合帶負(fù)電荷的內(nèi)毒素，對(duì)于質(zhì)粒DNA或者酸性蛋白質(zhì)的內(nèi)毒素去除效果會(huì)不夠理想，所以目前工業(yè)界傾向于親和層析的方法去除內(nèi)毒素。親和層析的好處在于能夠特異性結(jié)合內(nèi)毒素，終產(chǎn)品的損失少（相對(duì)于離子交換），應(yīng)用范圍較廣，包括質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)，同時(shí)，也不會(huì)有毒性物質(zhì)的引入。 本文將推薦一款來(lái)自英國(guó)Astrea Bioseparations的Etoxiclear?層析介質(zhì)，它是一種高性能、非離子交換、合成的親和層析吸附劑，可經(jīng)濟(jì)高效地去除內(nèi)毒素，支持GMP生產(chǎn)，有凝膠和一次性預(yù)裝柱兩種形式產(chǎn)品，滿(mǎn)足不同的工藝需求。 什么是EtoxiClear?親和層析？ 親和層析是一種特殊的蛋白質(zhì)純化方法，其利用生物分子之間的特異相互作用進(jìn)行分離。EtoxiClear?親和層析針對(duì)內(nèi)毒素具有高選擇性和高分辨率，可以更好的去除內(nèi)毒素。親和層析的優(yōu)點(diǎn)在于其高度特異性和高純度，適用于對(duì)純度要求很高的生物制品的生產(chǎn)。雖然過(guò)離子柱可以在一定程度上控制內(nèi)毒素水平，但是個(gè)別項(xiàng)目仍然會(huì)有超標(biāo)的可能。EtoxiClear?是市場(chǎng)上非常獨(dú)特的一款去除內(nèi)毒素的產(chǎn)品，相比于離子層析方法，EtoxiClear?優(yōu)勢(shì)包括：高特異性：專(zhuān)為去除內(nèi)毒素而設(shè)計(jì)，可特異性去除內(nèi)毒素高載量：高內(nèi)毒素動(dòng)態(tài)結(jié)合載量（> 1,000,000 EU/ml）；經(jīng)濟(jì)高效，支持放大；pH兼容范圍廣：pH 4.0 - pH 8.0，滿(mǎn)足GMP物料要求，法規(guī)注冊(cè)資料完善低蛋白結(jié)合率：通常目的蛋白回收率>90%；高度穩(wěn)定、人工合成、無(wú)毒的親和配基；有預(yù)裝柱和填料兩種產(chǎn)品形式，可滿(mǎn)足不同需求。填料耐堿性強(qiáng)：0.5M-1M NaOH CIP EtoxiClear?內(nèi)毒素親和填料性能數(shù)據(jù) 可擴(kuò)展性EtoxiClear?已被證明能夠在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模(5mL柱)和工業(yè)規(guī)模(785mL)下有效去除純化的免疫球蛋白溶液中的內(nèi)毒素。上樣：含有相似起始內(nèi)毒素濃度的IgG蛋白溶液(~5 mg/mL) 處理能力強(qiáng)EtoxiClear?可提供填料和預(yù)裝柱兩種形式產(chǎn)品，以滿(mǎn)足不同的實(shí)驗(yàn)需求。下表可用于估算處理不同規(guī)模樣品所需的柱尺寸。規(guī)格：EvolveD?柱，5 min保留時(shí)間 針對(duì)常用緩沖液的內(nèi)毒素清除數(shù)據(jù)EtoxiClear?可用于各種緩沖液的內(nèi)毒素去除。下表顯示了細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用中常用的各種緩沖液的內(nèi)毒素清除效率，即使較低的起始內(nèi)毒素濃度(~20EU/mL)也可以有較高的內(nèi)毒素清除率。* 等于或低于檢測(cè)限值 高內(nèi)毒素清除率EtoxiClear?具有很高的內(nèi)毒素清除率，可從多種蛋白樣品中進(jìn)行出色的蛋白質(zhì)回收，如下表所示的人血清白蛋白（HSA）和免疫球蛋白（IgG）溶液(均為~9 mg/mL)。 HSA樣品內(nèi)毒素清除率99.7% IgG樣品內(nèi)毒素清除率98.9% 低蛋白結(jié)合率與離子交換吸附劑不同，EtoxiClear?顯示出極低的蛋白質(zhì)結(jié)合性，不受蛋白質(zhì)等電點(diǎn)范圍限制，蛋白質(zhì)回收率高(通常高于90%)，如下所示： EtoxiClear?技術(shù)參數(shù) 產(chǎn)品訂購(gòu)信息貨號(hào)品名規(guī)格3250-00010EtoxiClear (10 mL)10mL3250-00025EtoxiClear (25 mL)25mL3250-00100EtoxiClear (100 mL)100mL3250-00500EtoxiClear (500 mL)500mL3250-01000EtoxiClear (1 L)1L6646EtoxiClear? 4 x 1 mL4x1mL6647EtoxiClear? 4 x 5 mL4x5mL6746EtoxiClear&reg; Column, 1 x 1 mL1 x 1 mL6747EtoxiClear&reg; Column, 1 x 5 mL1 x 5 mL4251-00005EtoxiClear 5 mL Column5mL4251-00050EtoxiClear 50 mL Column50mLAS025100-PC3250-GEtoxiClear 50 mL EvolveS50mL4520-PC3250EtoxiClear?, 200 µL200µL Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學(xué)，擁有超過(guò)30年層析介質(zhì)研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，是世界級(jí)層析介質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)供應(yīng)商。目前使用Astrea的產(chǎn)品已有超過(guò)21個(gè)生產(chǎn)工藝通過(guò)了FDA和EMA的批準(zhǔn)。Astrea Bioseparations在全球擁有3個(gè)研發(fā)和生產(chǎn)基地，專(zhuān)注為生物大分子和CGT領(lǐng)域提供行業(yè)領(lǐng)先的層析介質(zhì)和技術(shù)服務(wù)。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術(shù)，解決了傳統(tǒng)生物分離工具載量低和工藝耗時(shí)問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)更快、更環(huán)保、更具成本效益的純化過(guò)程，完全符合當(dāng)今生物治療創(chuàng)新的需求。 西美杰是Astrea Bioseparations中國(guó)區(qū)代理，為用戶(hù)提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎隨時(shí)撥打西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.cwwxw.cn了解更多信息。 更多>

Applichem藥典級(jí)二甲基亞砜DMSO，萬(wàn)能溶劑的卓越之選

二甲基亞砜(DMSO)是一種含硫有機(jī)化合物，因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)中具有一個(gè)親水的亞硫酰基和兩個(gè)疏水的甲基，它既可與水溶液也可與除石油醚外的大多數(shù)有機(jī)溶劑互溶，可以溶解約80%的化合物，具有“萬(wàn)能溶劑”的稱(chēng)號(hào)。在實(shí)驗(yàn)中通常應(yīng)用在以下方面： 1. 細(xì)胞凍存 DMSO是一種有效的低溫保護(hù)劑，能夠在細(xì)胞凍存過(guò)程中減少冰晶形成，降低冰晶對(duì)細(xì)胞的物理?yè)p傷。同時(shí)，DMSO能夠提高細(xì)胞膜的透過(guò)性，使細(xì)胞更易于吸收凍存保護(hù)劑，從而提高細(xì)胞在低溫下的存活率。 2. 藥物和化合物的溶解劑 DMSO具有極佳的溶解能力，能夠溶解許多其他溶劑難以溶解的有機(jī)化合物，包括多種藥物，這使得DMSO成為進(jìn)行藥物篩選和細(xì)胞治療研究中的理想溶劑。 3. 作為滲透劑 DMSO的滲透特性使其能夠增加細(xì)胞膜的透性，幫助藥物、DNA等分子進(jìn)入細(xì)胞。 4. 在化學(xué)和生物學(xué)反應(yīng)中的應(yīng)用 在某些化學(xué)合成和酶促反應(yīng)中，DMSO可作為反應(yīng)介質(zhì)，促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行或提高反應(yīng)的效率。DMSO還可能影響細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，對(duì)于研究細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程有時(shí)可以是一個(gè)有用的副作用。 PanReac AppliChem的藥典級(jí)二甲基亞砜 (貨號(hào)：191954)，歐洲生產(chǎn)，高純度，超低金屬離子含量，符合ICH Q3D質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，滿(mǎn)足USP, Ph Eur, BP等多國(guó)藥典。質(zhì)優(yōu)價(jià)廉，供應(yīng)穩(wěn)定，有1L、2.5L、5L、25L、190L多種規(guī)格，滿(mǎn)足不同應(yīng)用和工藝階段需求，一直受到全球客戶(hù)的廣泛青睞。 更多>

Pfanstiehl 喜獲第16個(gè)CDE登記號(hào)-鹽酸氨丁三醇Tris HCL

“ 熱烈祝賀Pfanstiehl的注射級(jí)鹽酸氨丁三醇Tris HCL（T-154）喜獲CDE登記號(hào)F20240000584. 這是Pfanstiehl產(chǎn)品獲得的第16個(gè)CDE登記號(hào)！”生物緩沖劑在生命科學(xué)研究中起著至關(guān)重要的作用。Tris （三羥甲基氨基甲烷） 和Tris HCL是生物制藥行業(yè)應(yīng)用非常廣泛的緩沖液，在維持溶液pH穩(wěn)定方面發(fā)揮著重要作用，Tris Base的應(yīng)用非常廣泛，可用于藥物生產(chǎn)、有機(jī)合成、生物緩沖劑等，而Tris-HCL是Tris和鹽酸（HCL）的混合物，主要作用增加溶液的離子強(qiáng)度，從而穩(wěn)定pH值。Tris-HCL也是其他緩沖液如TBS、TBST、TE等的重要成分。目前藥典對(duì)Tris HCL無(wú)專(zhuān)論，Pfanstiehl將贊助USP設(shè)立Tris HCL的專(zhuān)論。Pfanstiehl的Tris Base和Tris HCL均為注射級(jí)別，具有高純度，超低內(nèi)毒素，超低金屬雜質(zhì)殘留的特點(diǎn)，并同時(shí)檢測(cè)各種酶的殘留，如DNA酶，RNA酶，磷酸酶和脂肪酶等，也是全球首款將亞硝酸鹽加入質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的Tris Base和Tris HCL，符合生物制藥和疫苗的生產(chǎn)要求。目前Pfanstiehl的Tris Base和Tris HCL均已完成DMF和CDE的備案。產(chǎn)品信息： · 產(chǎn)品名稱(chēng): Tris HCl, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals· 中文名稱(chēng)：鹽酸氨丁三醇· 分子式：C4H12ClNO3· 分子量：157.59g/mol· CAS號(hào)：1185-53-1· 產(chǎn)品貨號(hào)：T-154產(chǎn)品特點(diǎn)：· 高純度，超低內(nèi)毒素，超低微生物含量，超低金屬雜質(zhì)殘留· 質(zhì)量指標(biāo)新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶，脂肪酶的檢測(cè)· 符合ICH Q3D標(biāo)準(zhǔn)DNA· 符合GMP標(biāo)準(zhǔn)· CDE登記號(hào)：F20240000584· DMF登記號(hào)：039584產(chǎn)品應(yīng)用：· 緩沖液 如果您對(duì)Pfanstiehl的Tris Base T-153和Tris HCL T-154感興趣，可聯(lián)系Pfanstiehl 中國(guó)區(qū)代理北京西美杰科技有限公司獲得詳細(xì)的產(chǎn)品概況說(shuō)明文件。也歡迎聯(lián)系獲取測(cè)試樣品。 Pfanstiehl Inc.最新產(chǎn)品系列如下，歡迎聯(lián)系北京西美杰獲取100g裝免費(fèi)樣品。北京西美杰科技有限公司為Pfanstiehl中國(guó)代理，為客戶(hù)提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎撥打西美杰客服電話(huà)400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.cwwxw.cn了解更多信息。 更多>

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